Cuantificación directa de proteínas de espectrofotómetros (método UV)
Este método es para probar la proteína directamente a una longitud de onda de 280 nm. Seleccione la fórmula de Warburg, el fotómetro puede mostrar directamente la concentración de la muestra, o seleccione el método de conversión apropiado para convertir el valor de absorbancia a la concentración de la muestra. El proceso de determinación de proteínas es muy simple. Pruebe primero el blanco y luego pruebe la proteína directamente. Debido a la presencia de algunas impurezas en el buffer, generalmente se elimina la información de "fondo" a 320 nm y esta función se establece en "ON". Similar al ácido nucleico de prueba, se requiere que el valor de absorbancia de A280 sea al menos mayor que 0.1 A, y el rango lineal óptimo esté entre 1.0-1.5. Cuando se utilizó la fórmula de Warburg para mostrar la concentración de la muestra en el experimento, se encontró que la lectura "deriva". Este es un fenómeno normal. De hecho, siempre que la observación del valor de absorbancia de A280 no exceda el 1%, el resultado es muy estable. La razón de la deriva es que el valor de absorbancia de la fórmula de Warburg se convierte en concentración y se multiplica por un determinado factor. Siempre que haya un ligero cambio en el valor de absorbancia, la concentración se amplificará y el resultado será muy inestable. Los métodos de cuantificación directa de proteínas son adecuados para probar proteínas relativamente puras, relativamente de un solo componente. La cuantificación UV directa es más rápida y fácil de realizar que la colorimetría; sin embargo, es susceptible a la interferencia de sustancias paralelas, como la interferencia de ADN, y la baja sensibilidad requiere altas concentraciones de proteínas.
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