El espectrofotómetro utiliza una fuente de luz que puede generar múltiples longitudes de onda y pasa a través de una serie de espectrómetros para generar una fuente de luz con una longitud de onda específica. Después de que la luz pasa a través de la muestra de prueba, se absorbe parte de la luz, se calcula la absorbancia de la muestra y se convierte la concentración de la muestra. . La absorbancia de la muestra es proporcional a la concentración de la muestra.
Cuando la radiación monocromática pasa a través de la solución de la sustancia medida, la cantidad absorbida por la sustancia es proporcional a la concentración de la sustancia y al espesor de la capa líquida (longitud de la trayectoria óptica). La relación es la siguiente:
A = -lg (I / I0) = - lgT = kLc
Donde: A es la absorbancia;
I0 es la intensidad de luz monocromática incidente;
I es la intensidad de luz monocromática transmitida;
T es la transmitancia del material;
k es el coeficiente de absorción molar;
L es la longitud del camino del material que se analiza, es decir, la longitud lateral de la cubeta;
c es la concentración de la sustancia;
La longitud de onda de absorción selectiva de la luz por una sustancia y el correspondiente coeficiente de absorción son las constantes físicas de la sustancia. Cuando se conoce el coeficiente de absorción de una sustancia pura bajo ciertas condiciones, la muestra de ensayo puede formularse en una solución en las mismas condiciones, y se puede determinar la absorbancia. El contenido de la sustancia en la muestra de prueba puede calcularse a partir de la fórmula anterior. En la región de la luz visible, a excepción de la absorción de la luz por ciertas sustancias, muchas sustancias no se absorben por sí mismas, pero pueden agregarse bajo ciertas condiciones o procesarse para hacerlas más decolorables. También se llama análisis colorimétrico. Debido al hecho de que hay muchos factores que afectan la profundidad de color durante la coloración, y se usan a menudo instrumentos con poca pureza de luz monocromática, se utilizan productos estándar o materiales de referencia para la medición simultánea.
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